Prospecção, caracterização e purificação de lipase microbiana

Abstract

As lipases são enzimas que catalisam a síntese e a hidrólise de triacilglicerídeos em glicerídeos e ácidos graxos. Sua utilização como catalisador biológico tem tomado vários aplicações na indústria farmacêutica e alimentar. Sua fonte pode ser tanto de origem animal, vegetal e microbiológica. Com grande destaque para a última devido às vantagens como forma de obtenção, manuseio e grande diversidade, o que torna os fungos filamentosos uma ampla fonte de lipases. A busca por novas fontes proporciona vários trabalhos com objetivos específicos. Assim o objetivo do trabalho foi selecionar e avaliar dentre duas coleções de fungos filamentosos, possíveis produtores de lipases. Para este estudo, 316 isolados foram efetivamente testados quanto à atividade lipolítica em meio de cultura líquido indutor de lipase (óleo de oliva). Desse total, 298 (94%) apresentaram-se lipase positivos e suas atividade verificada a partir da reação de hidrólise com o substrato p-NPP com leitura no espectrofotômetro a 410 nm. Como forma de seleção, apenas os isolados que apresentaram atividade acima de 7000 U/ml foram selecionados. Com isso, somente seis isolados apresentaram atividades consideradas boas e foram submetidas a novos ensaios com a atividade enzimática em óleo de dendê. A cepa mais promissora foi identificada através de técnicas moleculares como Endomelanconiopsis endophytica, produzindo uma atividade de 7895 U/mL para o óleo de oliva e 10727 U/mL para o óleo de dendê. O extrato bruto foi então purificado através da cromatografia de troca iônica, resultando em três enzimas de forma ativa (duas de 60 e uma de 46 kDa) quantificada em SDS-PAGE. E suas identidades verificadas através do espectro de massa e do sequenciamento do N-terminal, pela degradação de Edmann. Duas delas apresentaram-se bloqueadas e a de 46 kDa foi obtida sua sequência. Assim o estudo procurou contribuir para a descoberta de novas lipases com o potencial biotecnológico, contribuindo para um futuro banco de dados protéico. Palavras-chave: lipases extracelulares, fungos filamentosos, fermentação submersa; purificação