Caracterização parcial de proteases produzidas por espécies de Penicillium
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Universidade do Estado do Amazonas
Resumo
In world use of enzymes the proteases are highlighted, corresponding to 60% of the total of
biocatalysts sold in the world applied in diversified industries. Most of the proteases
commercialized are derived from filamentous fungi, however, although several studies point
to the production of these enzymes from Penicillium species, little is known about the partial
characterization of proteases of species from the Amazon region. The objective of this work
was to evaluate the potential of the proteolytic enzymes that present specific characteristics
obtained from the crude extract of P. fellutanum CFAM 60, Penicillium sp. CFAM 91 and P.
citrinum CFAM 233, yielded by the Fungi Collection of the Amazon-CFAM / FIOCRUZAM,
produced by submerged fermentation. The species were cultivated in Czapek Yeast
Extract Agar in Petri dishes, maintaining the cultures at 25 ° C for seven days. From the
cultures obtained, 3 mycelial discs were removed to be inoculated in 50mL MGYP [(glucose
+ peptone + yeast extract, pH 6.0). The fermentation in liquid medium was under the stirring
and stationary condition, incubated at 30ºC, 150rpm And the enzyme activity was determined
by the enzymatic activity of the extracts and the enzyme activity of the enzyme, and the
enzyme activity was determined by the enzymatic activity for all extracts, being the highest
value 43.13 U / mL, in the extracts obtained from P. citrinum CFAM 233, and the lowest
value 34.17 U / mL of Penicillium sp. CFAM 91. In the extracts obtained by stationary
culture, the species that presented the best enzymatic activity, in the value of 34.22 U / mL,
was P. fellutanum CFAM 60, and the lowest activity, 11.24 U / mL, was P. citrinum CFAM
233. For the partial characterization of enzyme, the species of P. citrinum CFAM 233 was
selected and it was observed that pH and temperature of the proteases were pH 6.0 and 50,
respectively. When subjected to the stability test, the enzyme remained stable at pH 6.0-10.0,
with 100% activity and 25-30ºC. Thus, it can be concluded that P. citrinum CFAM 233
presents better protease production and, when subjected to fermentation under agitation, these
enzymes have acid characteristics and affinity at high temperature, inferring their application
in the food industry.
Descrição
No uso mundial de enzimas as proteases estão em destaque, correspondendo a 60% do total
de biocatalisadores comercializados no mundo aplicadas em industrias diversificadas. Grande
parte das proteases comercializadas são proveniente de fungos filamentosos, no entanto
apesar de diversas pesquisas apontarem para a produção destas enzimas a partir de espécies de
Penicillium, pouco se sabe sobre a caracterização parcial de proteases de espécies da região
Amazônica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a potencialidade das enzimas proteolíticas
que apresentem características específicas obtidas do extrato bruto de P. fellutanum CFAM
60, Penicillium sp. CFAM 91 e P. citrinum CFAM 233, cedidos pela Coleção de Fungos da
Amazônia-CFAM/FIOCRUZ – AM, produzidos por fermentação submersa. As espécies
foram cultivadas em Ágar Extrato de Levedura Czapek, em placa de Petri, mantendo os
cultivos a 25oC, durante sete dias. Dos cultivos obtidos foram retirados 03 discos miceliais
para serem inoculados em 50mL de MGYP [(glicose + peptona + extrato de levedura, pH
6,0]. A fermentação em meio líquido foi sob a condição de agitação e estacionária, incubados
a 30ºC, 150rpm. Após cinco dias o extrato foi filtrado a vácuo. Para a determinação da
atividade das proteases utilizou-se 150μL do extrato e 250μL de azocaseína em tampão Tris-
HCl, pH 7,2, realizando a leitura a 440nm. A atividade proteolítica foi determinada para todos
os extratos, sendo de maior valor 43,13 U/mL, nos extratos obtidos de P. citrinum CFAM
233, e o menor valor 34,17 U/mL de Penicillium sp. CFAM 91. Nos extratos obtidos por
cultivo estacionário, a espécie que apresentou melhor atividade enzimática, no valor de 34,22
U/mL, foi P. fellutanum CFAM 60, e a menor atividade, 11,24 U/mL, foi o P. citrinum
CFAM 233. Para a caracterização parcial da enzima, foi selecionada a espécie de P. citrinum
CFAM 233 e observou-se que o pH e temperatura ótimos das proteases foram em pH 6,0 e
50ºC, respectivamente. Ao ser submetida ao teste de estabilidade, a enzima manteve-se
estável do pH 6.0-10.0, com 100% de atividade e de 25 a 30ºC. Assim pode-se concluir que
P. citrinum CFAM 233 apresenta melhor produção proteases e, quando submetido a
fermentação sob agitação, tais enzimas têm característica ácida e afinidade em temperatura
elevada, inferindo sua aplicação na indústria de alimentos.
Palavras-chave
Citação
BRITO, Ana Kezia Pimentel de. Caracterização parcial de proteases produzidas por espécies de Penicillium. 2018. 32 f. TCC (Graduação em Ciências Biológicas) - Universidade do Estado do Amazonas, Manaus.
