Avaliação do perfil de biomarcadores imunológicos no perfil clínico de pacientes com anemia falciforme

Abstract

Introdução: A anemia falciforme é a doença monogênica de maior frequência no mundo. A mutação causa uma mudança na molécula de hemoglobina, que leva a um quadro de hemólise, acentuado em crises agudas de inflamação e caracterizado pela ativação do sistema imunológico. A participação de moléculas como quimiocinas, anafilotoxinas, citocinas e fatores de crescimento liberadas principalmente pelos leucócitos e células endoteliais aumenta o risco de desenvolver crises vaso-oclusivas e assim, as complicações clínicas observadas nesses pacientes. Devido à atuação das moléculas imunes na fisiopatologia falciforme, em diferentes quadros clínicos, ligado à escassez de estudos de biomarcadores, salienta-se a necessidade de caracterizar a concentração destas proteínas no estado inflamatório da anemia falciforme. Objetivo: Avaliar o perfil de moléculas imunológicas em pacientes com anemia falciforme em diferentes estados clínicos acompanhados na Fundação Hospitalar de Hematologia e Hemoterapia do Amazonas (HEMOAM). Material e métodos: Este é um estudo longitudinal que utilizou amostras biológicas de 53 doadores saudáveis, 27 pacientes com anemia falciforme em estado estacionário e 22 em crise aguda vaso-oclusiva, sendo estes últimos acompanhados com mais uma coleta, na fase de convalescença. As amostras foram provenientes de projetos já aprovados pelo CEP-HEMOAM. O hemograma foi realizado em analisador automatizado com amostras de sangue total, enquanto o soro foi utilizado na quantificação de citocinas, quimiocinas, fatores de crescimento pela técnica de Luminex, pelo kit The BioPlex Pro-Human Cytokine 27-Plex da BioRad na FIOCRUZ-MG e analisadas pelo software BioPlex Manager. As anafilotoxinas foram dosadas na Fundação HEMOAM pela técnica de Cytometric Bead Array, com o kit The BD™ CBA Human Anaphylatoxin e para aquisição foi utilizado o software FCAP Array. A análise estatística foi realizada no software GraphPad Prism v. 5.0, com intervalo de confiança de 95% e valor de p < 0.05 como estatisticamente significativo. A rede de correlação foi feita no software Cytoscape v.3.1 e os heatmaps no software R 3.0.1. Resultados: Identificamos maior concentração de IL-2, IL-4, IL-5, IL-7, PDGF-BB e G-CSF nos pacientes em crise vaso-oclusiva, que posteriormente demonstraram uma assinatura de biomarcadores para esta condição clínica. Outras moléculas apresentaram diferenças entre os perfis clínicos, mas não foram exclusivas apenas para o grupo de crise. A concentração de IL-10, IL-1ra e IL-1β foram identificadas por técnicas bioinformáticas com potencial para caracterizar os pacientes entre os estados clínicos. Na fase de convalescença, a CXCL8, CCL4, IL-1ra e PDGF-BB se mostraram potenciais marcadores de acompanhamento laboratorial após a crise. A análise da correlação mostrou maior relação das moléculas entre si no estado de crise, que tende a reduzir através da fase de convalescença, até o estado estacionário. Conclusão: O perfil de crise é marcado por citocinas anti-inflamatórias e de proliferação celular. IL-1ra e PDGF-BB são potenciais candidatos para marcadores de recuperação laboratorial, e concentração sérica de IL-10, IL- 1ra e IL-1β podem ser utilizados para caracterizar o estado clínico do paciente falciforme. Mais estudos devem ser conduzidos para avaliar o potencial destas moléculas na progressão clínica, no prognóstico e no acompanhamento dos pacientes após a crise.