Avaliação da biodiversidade de bactérias não cultiváveis associadas a anofelinos e seu habitat

Abstract

A malária é uma doença parasitária responsável por milhares de mortes anualmente em todo o mundo, é transmitida por mosquitos do gênero Anopheles. Tem como principal vetor no Brasil o Anopheles darlingi, Root, 1926. Segundo a literatura estes vetores encontram-se associados a uma grande diversidade de micro-organismos, adquiridos principalmente durante a fase imatura por meio da alimentação larval, dentre os quais se destacam as bactérias, que podem interferir diretamente na capacidade vetorial do mosquito. A interação destas bactérias com as formas imaturas desses vetores em seus criadouros é um fator relevante para estabelecer importantes estratégias de controle da transmissão desta doença. Portanto, considerando que não há estudos sobre a biodiversidade microbiana associada a larvas do A. darlingi e seu habitat aquático, especialmente na Região Amazônica, este trabalho teve como objetivo caracterizar a microbiota bacteriana associada a esta espécie e os seus criadouros naturais e/ou artificiais, no estado do Amazonas-AM. Foram coletadas amostras de larvas e de água dos criadouros de A. darlingi no estado de Amazonas. A extração de DNA das amostras de larvas foi realizada pelo kit innuPREP Plant DNA®, e as amostras de água foram submetidas a choques térmicos para a lise celular. Após a obtenção do DNA genômico, realizou-se a amplificação do gene 16S do rDNA com os primers 27F (5’AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3’) e 1100R (5’-AGGGTTGCGCTCGTT-3’). Os produtos de amplificação obtidos foram sequenciados e a identificação taxonômica foi feita a partir da comparação das sequências obtidas com as sequências depositadas no banco de dados de sequências de 16S rRNA RDP II pelo programa Classifier. O sequenciamento da região 16S rRNA das 37 amostras provenientes de larvas de 4° estádio e de água de criadouros de A. darlingi, gerou 827.842 sequências que foram agrupadas em 6.714 OTUs (Unidades Taxonômicas Operacionais) bacterianas. Para a realização das análises taxonômicas foram selecionadas as 20 OTUs mais representativas, que apresentaram mais de 10.000 sequências. Destas, foram identificados 11 gêneros, 11 famílias, 8 ordens, 7 classes pertencentes aos filos Actinobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes, Verrucomicrobia e Proteobacteria. O filo Proteobacteria foi o mais predominante, estando presente em 80% das OTUs analisadas. Desta forma demonstrou-se que as larvas de A. darlingi e seu habitat aquático abrigam uma rica diversidade bacteriana.

Palavras-Chave: Anopheles darlingi, Biodiversidade, Bactérias.